人趋化因子配体9（CXCL9）试剂盒（ELISA）

【产品介绍】

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人趋化因子配体9 （CXCL9）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育 并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化 成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人趋化因子配体9（CXCL9）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

【产品包装】

备注：

1.   标准品浓度依次为：   800 、400 、200 、100 、50 、25 pg/mL

2. 经过大量正常标本检验， 标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，   实验过程中 直接取50μL样本上样即可 。   当有部分样本值超过最大标准品浓度时，   可用样本稀释液将标本 进行适当稀释后再进行实验 。   温 20-25℃ 。使用后立即冷藏保存试剂。

【保存条件】

有效期：   6个月，   保存温度2- 8 ℃。

样本处理及要求

【 血清】

将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，    然后1000×g离心20 分钟，取 上清即可，   或将上清置于-20℃或-80℃保存 ，但应避免反复冻融。

【 血浆】

用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，    并将标本在采集后的30分钟内于2-8 ℃ 1000 ×g离心15 分钟，取上清即可检测，   或将上清置于-20℃或-80℃保存 ，但应避免反复冻融。

【 组织匀浆】

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，    去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果) ，称重后将组织剪碎 。 将剪碎的组织与对应体积的PBS (一般按1:9的重量体 积比，   比如1g的组 织样品对应9mL的PBS， 具体体积可根据实验需要适当调整，   并做好记录 。    推荐在PBS中加入 蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，   于冰上充分研磨 。   为 了进 一 步裂解组 织细胞，   可以对匀 浆液进行超声破碎，   或反复冻融 。   最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，    取上清检测。

【 细胞培养物上清或其它生物标本】

请1000×g离心20分钟，   取上清即可检测，    或将上清置 于-20℃或-80℃保存，   但应避免反复冻融。

 注：标本溶血会影响最后检测结果，   因此溶血标本不宜进行此项检测。

【需要准的的器材与试剂】

    酶标仪(450nm)

    高精度加样器及枪头：   0.5- 10uL、2-20uL、20-200uL、200- 1000uL

     37℃恒温箱

    蒸馏水或去离子水

    试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用 。      20×洗涤缓冲液的稀释：   蒸馏水

按1：20稀释，   即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

【实验步骤】

1.    从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条， 剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.    设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3.   样本孔中加入待测样本 50μL；   空白孔不加。

4 .     除空白孔外，   标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP) 标记的检测抗体 100μL， 用封板膜封住反应孔，   37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5.   弃去液体，   吸水纸上拍干，   每孔加满洗涤液 (350μL) ，静置 1min，甩去洗涤液，   吸水纸 上 拍干 ，如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板)。

6.   每孔加入底物 A 、B 各 50μL ，37℃ 避光孵育 15min。

7.    每孔加入终止液 50μL， 15min 内 ，在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。

【实验结果计算】

以所测标准品的OD值为横坐标，   标准品的浓度值为纵坐标，   在坐标纸上或用相关软件绘 制标准曲线， 并得到直线回归方程， 将样品的OD值代入方程， 计算出样品的浓度。

【试剂盒性能】

1.   检测范围：62.5 pg/mL – 2000 pg/mL。

2.   灵敏度：最低检测浓度小于 10 pg/mL。

3.   特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.   重复性：板内变异系数小于 10%  ，板间变异系数小于 15%  。

【特殊情况说明】

由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分 析， 本产品可能存在一 定的质量技术风险。

1.     最终的实验结果与试剂的有效性 、   实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，   请 务必准备充足的标本备份。

2.    不同批次的同一产品可能会有少许差别 ，如：    检测限 、   灵敏度以及显色时间等，   请依据 试剂盒内说明书进行实验操作，   网站电子版说明书仅作参考。

3.    只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，   不能混用其他制造商的产品 。   只有 严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。

4.    本公司只对试剂盒本身负责，   不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，   请使用者使 用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

5 .     使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的 引 入导致 ELISA 实验结果偏差。

6.    若样本为细胞培养上清，   因该类样本干扰因素较多 ，如：   细胞状态 、   细胞数量 、   采样时 间等， 所以可能存在检测不出的情况。

7.     某些天然蛋白或重组蛋白，   包括原核及真核重组蛋白，   可能因为与本产品所使用的检测 抗体及捕获抗体不匹配，   而不被检测。